周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究
目的：构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱氢酶重组复合基因(BmCPI／GAPDH)真核表达质粒，观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法：依据公布的BmCPI及BmGAPDH基因序列设计引物，以周期型马来丝虫总RNA为模板，反转录PCR(RT—PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后，与pGEM—T Easy克隆载体连接，筛选出阳性克隆。经PCR和双酶切鉴定后，取阳性重组质粒pGEM—T／BmCPI和pGEM—T／BmGAPDH以及真核重组表达载体分别双酶切，将酶切后的载体和目的片段进行连接，构建真核重组表达质粒pcDNA3．1(+)-BmCPI／BmGAPDH。将纯化的pcDNA3．1(+)-BmCPI／BmGAPDH和CpG经后腿胫前肌免疫BALB／c小鼠，并设正常对照组及空质粒对照组，共免疫3次，每次免疫间隔2周。用RT—PCR方法检测肌肉组织内目的基因：用MTT、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子INF—Y、IL-4水平。结果：成功构建了pcDNA3．1(+)-BmCPI／BmGAPDH复合基因真核表达载体。该真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。免疫小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于两对照组(P<0．05)。pcDNA3．1(+)-BmCPI／BmGAPDH组INF—γ、IL-4细胞因子水平均高于两对照组(P<0．05)，其中IFN-γ水平与pcDNA3．1-BmCPI／CpG组相比也有明显提高(P<0．05)。结论：pcDNA3．1(+)-BmCPI／BmGAPDH重组复合基因真核表达载体能在小鼠体内表达并可有效诱导特异性细胞免疫应答。
周期型马来丝虫 复合基因 免疫应答效应 基因疫苗
方政 陆施娟 张赛楠 王慧 方浩 童海燕 徐邦生
南通大学医学院寄生虫学教研室 226001
国内会议
黄山
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197-209
2012-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）