TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究
(0) 目的：建立一种特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法：针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,并与市售荧光PCR试剂盒进行比较。对110份小型猪样本进行支原体检测,同时进行细菌分离培养和常规PcR检测。结果：建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PcR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2 copies,比市售荧光PCR检测试剂盒的灵敏度高100倍。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(R2)为O.998,斜率为-3.328,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100％,组内和组闻重复性试验Ct值变异系数分别在0．1％～1．4％和0．02％～1．9％之间。对110份小型猪样本进行TaqMan MGB探针实时荧光定量PcR检测、细菌分离培养和常规PcR检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PcR和常规PcR均能检出23份支原体阳性样本,但细菌分离培养未能检出支原体阳性样本,结果显示建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PcR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从小型猪样本中检出支原体DNA,检测时间仅为40 min。结论：研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PcR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于支原体的快速检测。
支原体 实时检测 探针技术 荧光定量法 动物实验
高正琴 邢进 冯育芳 岳秉飞 贺争鸣
中国食品药品检定研究院,北京 100050
国内会议
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25-31
2011-08-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）