小鼠脑脊髓炎病毒非编码蛋白(UTR)片段实时荧光定量PCR标准品的构建
目的:构建小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)非编码蛋白(UTR)片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测小鼠脑脊髓炎病毒。方法:RT-PCR扩增TMEV UTR片段上80-1094nt之间长度为1014bp的片段,将目的片段连接至pMD18-T载体,转化至DH5α感受态细胞。分别经PCR鉴定和序列测定验证重组质粒的正确性。分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝数浓度后作10倍梯度稀释制得质粒标准品。然后进行实时荧光定量 PCR分析,绘制标准曲线。结果:TMEV UTR片段成功克隆至pMD18-T载体中,重组质粒序列完全正确,实时荧光定量PCR分析10倍梯度系列稀释的质粒标准品所得到的标准曲线良好,统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上。结论:成功构建了TMEV UTR片段实时荧光定量PCR标准品。
脑脊髓炎病毒 实时荧光定量 标准品 非编码蛋白
袁文 张钰 王静 刘香梅 黄韧
广东省实验动物重点实验室,广东省实验动物监测所,广州 510260
国内会议
海口
中文
742-748
2011-11-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)