版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的：快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因THF-α的表达情况,构建THF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法：利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5a,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR,生成标准曲线。结果：建立的THF-α基因和GAPDH内参基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法灵敏度分别可达103和105拷贝,线性范围分别为103-109和105～109拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在的线性关系R2分别为0.993和0.999,扩增效率E分别为111.073%和95.948%。结论：成功的构建了版纳微型猪近交系THF-α基因质粒标准品和标准曲线,并用内参基因GAPDH进行校正,此方法可为探讨THF-α基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。
动物临床疾病 THF-α基因 GAPDH基因 实时荧光定量 基因表达
霍金龙 李颖 赵跃 潘伟荣 刘丽仙 霍海龙 曾养志
云南农业大学,云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201 昆明医学院,第二附属医院整形外科,昆明 650101 云南农业职业技术学院,畜牧兽医系,昆明 650212
国内会议
2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会
东莞
中文
45-51
2011-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）