西藏小型猪Leptin及其受体胞外区片段的克隆及原核表达
目的：克隆及原核表达西藏小型猪瘦素(Leptin)成熟肽及瘦素受体胞外区片段。方法：根据西藏小型猪瘦素序列(GenBank号：GQ240885.1)和猪瘦素受体基因胞外域序列(GeIlBank号：AF167719.1)分别设计并合成两对引物扩增瘦素、瘦素受体基因胞外域编码区1654—2319位片段,以西藏小型猪组织总RNA为模板,经反转录，聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片段。再以该两个特异性片段为模板,另外设计两对套式引物分别扩增瘦素64.504位(成熟肽编码区)和瘦素受体基因胞外域编码区1655-2314 bp的cDNA片段,将该两片段克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌E.eoIiDH5a测序并永久保存。此两片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的BamH I和HindⅢ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-OB和pR-OBR-a并在大肠杆菌E.eoliBL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。结果：在IPTG诱导下促使重组菌pR-OB表达了相对分子质量约18.0KDa左右的融合蛋白；重组菌pR-OBRo-a表达了相对分子质量约27KDa左右的融合蛋白。结论：说明重组质粒pR-OB、pR-OBR-a在大肠杆菌BL2 1(DE 3)中分别可表达西藏小型猪瘦素成熟肽、瘦素受体片段蛋白,为进一步研究瘦素、瘦素受体功能和应用提供了基础。
动物模型 瘦素 瘦素受体 胞外区片段克隆 原核表达
吴丽红 范沛 王丛莉 刘玉鹏 黄黎珍 施振旦 顾为望
南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所,广州 510515 华南农业大学动物科学学院,广州 510642
国内会议
2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会
东莞
中文
52-57
2011-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）