真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用
以真鲷虹彩病毒(red-sea bream iridovims，RSIV)主要衣壳蛋白(major capsid protein，MCP)的基因的保守片段为靶序列，利用Primer Express 3.0 软件设计定量PCR引物，建立了RSIV的SYBR Green I实时定量PCR检测方法。将RSIV MCP基因连接pMD8-T载体，构建重组质粒，经过梯度稀释后作为标准品，根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线，为Ct=-3.184lgX+40.270，相关系数R2=0.9969。熔解曲线分析表明定量PCR产物的Tm值为82.5℃。该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应，对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应，具有特异性。利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测，其中5批鱼样品感染RSIV，并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析。本实验建立的实时定量PCR检测方法，具有灵敏度高、特异性好、快速、简便、准确等优点，可以广泛应用于RSIV的病原检测和致病机理研究方面。
真鲷虹彩病毒 检测方法 实时定量PCR法 衣壳蛋白基因
赵玉然 岳志芹 谭乐义 刘荭 赵巍 梁成珠 史秀杰 徐彪 朱来华 何俊强
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2011-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）