分枝杆菌膜锚定表达载体的构建与亚细胞定位分析
目的：构建分枝杆菌膜锚定表达载体，并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位。方法：在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造，人工合成结核分枝杆菌(Mtb)19kDa脂蛋白膜分泌信号序列，将其插入高效的突变犁fuirA基因启动子(pfurAma)下游构建新型的分枝杆菌膜锚定表达载体pMFA42M。PCR扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因，亚克隆至上述两种载体中并电转化分枝杆菌(Ms)，分别获得重组EGFP融合表达菌株和膜锚定表达菌株。结果：通过引入Mtb19 kDa脂蛋白膜分泌信号，在高效pfuarAma启动子的驱动下，成功地构建了分枝杆菌膜锚定表达载体。利用EGFP作为标签抗原，通过Western-blot、荧光显微观察和流式细胞表面标记等技术均证实了外源目标抗原可在分枝杆菌中高水平表达并定位至细胞膜上。结论：本研究为重组BCG和分枝杆菌膜蛋白功能研究提供了一种新型的膜锚定表达载体，所构建的EGFP重组表达菌株亦可作为一种模式示踪菌为细胞吞噬和动物免疫中的细菌定植和移位分析提供新思路。
分枝杆菌 膜分泌信号肽 绿色荧光蛋白 膜锚定表达载体 亚细胞定位
王鑫 范小勇 马辉 曲 朱越雄
上海复旦大学附属上海市公共卫生临床中心 201508
国内会议
西安
中文
70-79
2011-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）