慢病毒介导短发夹状RNA沉默生存素基因对人异位内膜细胞增殖和凋亡的影响
目的：研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体，将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞，分别以不加病毒液及空载慢病毒感染的异位内膜细胞作为空白对照及阴性对照。采用RT-PCR、Western-blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖，Cy5-Annexin V／PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果：与空白对照及阴性对照组相比，shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达量均显著下降，survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64.20％和58.79％；MTT法检测细胞感染后第1～5d的吸光度(A)值，结果显示，除感染后第1d外，实验组A值均明显低于阴性对照组和空白对照组(P值均<0.001)，而后两组细胞的增殖速度差异无统计学意义(P值均>0.05)。感染后不时间点之间A值有现著差异（p<0.001），shRNA慢病毒感染后异位内膜细胞增殖抑制率有时间依赖性，感染后第1～5d的细胞增殖抑制率分别为2.97%、36.19%、52.22%、58.45%、65.96%；流式细胞仪分析显示，实验组细胞凋亡率位（41.61±3.64)%，明显高于阴性对照组的（9.14～1.88)%和空白对照组的(7.07～1.16)%(P<0.01），后两组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：慢病毒介导survivin基因特异性shRNA在体外可高效地感染异位内膜细胞，其可在转录及翻译两个水平上高效、特异地沉默异位内细胞中survivin基因的表达，显著促进异位内细胞的凋亡，明显抑制异位内细胞的增殖，并随着时间延长，其抑制效应呈增强趋势，而空载慢病毒本身对细胞生长无明显影响。
子宫内膜异位症 基因表达 细胞增殖 细胞凋亡 临床试验
彭冬先 何援利 丘立文
南方医科大学珠江医院妇产科 临床医学基础研究所 510282
国内会议
青岛
中文
145-149
2011-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）