周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究
目的：构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)基因真核表达载体poDNA3．1-BmCPI，并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法：以周期型马来丝虫总RNA为模板，RT-PCR方法扩增出目的基因片段。与pGEM-T Easy克隆载体连接，筛选出阳性克隆，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1，构建pcDNA3．1-BmCPI表达载体，将纯化的pcDNA3．1-BmCPI和CpG经后腿胫前肌免疫BALB/c小鼠，并设正常对照组及空质粒对照组,共免疫3次,每次免疫间隔2周。用RT-PCR方法检测肌肉组织内目的基因；用WTT、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子INF-γ、IL-4水平。结果：成功构建了pcDNA3．1-BmCPI真核表达载体，基因片段全长为621 bp，DNA序列分析与基因库已知基因序列同源性为99％。该真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。免疫小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于两对照组(P<0．05)。pcDNA3．1-BmCP1组INF-γ、IL-4细胞因子水平均高于两对照组(P<0．05)。免疫佐剂CpG与疫苗同时注射可增强机体的免疫应答反应，表现为IFN-γ水平和免疫四周后淋巴细胞刺激增殖指数显著上升。结论：pcDNA3．1-BmCPI真核表达载体能在小鼠体内表达并可有效诱导特异性细胞免疫应答。
周期型马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 真核表达载体 细胞免疫应答
方政 张赛楠 陆施娟 童海燕 方浩 徐邦生
南通大学医学院寄生虫学教研室，江苏 南通 226001
国内会议
济南
中文
275-279
2011-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）