幽门螺杆菌感染对大鼠血小板功能的影响
目的：幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)感染与上消化道疾病的关系明确，近年来研究根除H.pylori可使部分特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)患者血小板数量恢复正常，但其确切机制尚不明确。本研究采用H.pylori感染的大鼠模型，探讨H.pylori感染对大鼠血小板活化及凝集的影响。方法：1. H.pylori菌株及培养：H.pylori标准菌株SS1(由北京大学第一医院消化内科王蔚虹教授惠赠)接种于含10%去纤维素羊血的琼脂(OXOID, England)平板培养基上，于37℃,微需氧环境培养48小时。H.pylori菌落直接收集在浓度为3.7%的灭菌心脑浸液(OXOID, England)中，调制菌液浓度在1×108CFU/ml的混悬液，半小时内灌胃。2. H.pylori感染大鼠动物模型的建立：6周龄雄性SPF级SD大鼠20只，屏障环境饲养(北京大学医学部动物研究所购买及饲养)，环境温度控制在20-22℃, 12/12hr明暗交替，标准商品化动物饲料饲养，随意进食水.适应环境2周后，随机分为对照组(NS组)及H.pylori感染组(Hp组)，分别予以0.9%生理盐水1 ml及H.pylori混悬液1 ml灌胃，每日1次，共3天。3.制备富含血小板血浆及乏血小板血浆。4.确认幽门螺杆菌定植。5.测定血小板P-选择素的表达。6.血小板凝集实验：采用血小板凝集仪(Steellex, LG-PABER)检测。富含血小板血浆0.3ml室温在持续磁珠搅拌下，分别加入腺苷二磷酸2ul( ADP，终浓度5mM)及可溶性Ⅰ型胶原5ul (Collagen Ⅰ, BD, USA,终浓度10ng/ml)刺激富血小板血浆，检测5min血小板的凝集率。测定乏血小板血浆在上述同样刺激下的血小板凝集作为阴性对照。结果：1.大鼠H.pylori感染的鉴定：10只H.pylori灌胃组的尿素酶及W-S染色均为阳性，10只生理盐水灌胃组的尿素酶及W-S染色均为阴性。提示本实验H.pylori组10只大鼠H.pylori均定植成功。2.血小板表面P-selectin的表达：流式细胞仪检测结果显示，血小板表面P-选择素表达率在Hp感染组为(41.94±4.67)%，生理盐水组为(24.11±4.55)%，两组之间差别有统计学意义，P=0.00。结论：SD大鼠感染H.pylori能够诱导血小板活化，增强血小板对刺激的反应性。
幽门螺杆菌 上消化道疾病 血小板数量 活化作用 凝集行为
林香春 刘芳勋 侯君 吴静
北京世纪坛医院消化科 北京世纪坛医院检验科
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2011-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）