氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖及凋亡的影响
目的：利用过氧化氢(H2O2)作为活性氧来源，建立人胰腺导管上皮细胞氧化应激损伤模型，研究氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖及凋亡的影响。方法：①常规培养人胰腺导管上皮细胞(hTERT-HPNE cell，美国ATCC，货号CRL-4023TM)。②建立人胰腺导管上皮细胞氧化应激损伤模型：将30%H2O2按浓度梯度0、25、50、100、200、300μmol/L和时间梯度0h、6h、12h、24h、48h作用于hTERT-HPNE cell，检测各组细胞SOD活性、GSH-PX浓度、MDA浓度和活性氧水平。③研究H2O2对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响：MTT比色法检测细胞OD值，绘制细胞生长曲线，计算细胞存活率；PI单染色法检测细胞周期，计算细胞增殖指数(PI’)。④研究H2O2对人胰腺导管上皮细胞凋亡的影响：利用倒置相差显微镜观察细胞数量及形态学变化；PI单染色法检测细胞凋亡情况。结果：①建立人胰腺导管上皮细胞氧化应激损伤模型：H2O2处理hTERT HPNE cell 6h各H2O2组细胞内活性氧水平升高，细胞上清液SOD活性增强(P＜0.05 ) , GSH-PX及MDA浓度均明显降低(P＜0.01)，细胞裂解液SOD活性明显增强(P＜0.01), MDA浓度无明显变化(P＞0.05 )；随着H2O2浓度的升高和作用时间的延长，各H2O2组细胞内活性氧水平继续升高，细胞上清液SOD活性逐渐减弱，GSH-PX浓度继续降低，MDA浓度逐渐升高，细胞裂解液SOD活性亦逐渐减弱，MDA浓度亦逐渐升高；48h上述变化最为显著。②H2O2对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响：H2O2处理hTERT-HPNE cell 6h仅H2O2 300μmol/L组细胞存活率有所下降(79.1±9.21)%；P＜0.05，即出现抑制细胞增殖作用。12h仅H2O2 300μmol/L组细胞OD值减低(0.277±0.022)； P＜0.05，细胞存活率明显下降(56.90±29.91)%；P＜0.01，即其抑制细胞增殖作用加强。结论：①将30%H2O2按浓度梯度0, 25, 50, 100, 200, 300μmol/L和时间梯度0h, 6h, 12h,24h, 48h作用于人胰腺导管上皮细胞，建立氧化应激损伤模型。②低浓度H2O2促进人胰腺导管上皮细胞增殖，高浓度H2O2抑制其增殖，呈时效和量效关系。③H2O2对人胰腺导管上皮细胞凋亡的影响不明显。
氧化应激疗法 损伤模型 过氧化氢 胰腺导管 上皮细胞
戴欣欣 杨立新 郝建宇
首都医科大学附属北京朝阳医院消化内科
国内会议
北京
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192-193
2011-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）