构建并鉴定大鼠Uqcrfs1的真核表达系统

摘要：

　　目的：构建大鼠Uqcrfs1基因的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达，为进一步研究其生物学意义提供实验基础。方法：以大鼠肾组织总RNA为模板，分别在上下游引物5”端引入特异酶切位点，应用RT- PCR方法扩增出编码Uqcrfs1的cDNA。将PCR产物克隆至pUM-T载体，经限制性内切酶消化及测序，证实为Uqcrfs1 cDNA序列后，将Uqcrts1/pUM-T重组子亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His。经限制性内切酶鉴定及测序正确后，采用磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293下细胞，同时转染载体pcDNA3.1/V5-His及绿色荧光蛋白，分别作为对照以及观察转染效率的参照。结果：RT-PCR方法检测到Uqcrfs1 mRNA的表达，Western Blot方法检测到融合蛋白的表达，pcDNA3.1/V5-His空载体转染组、HEK 293T细胞组均未在转录与蛋白表达水平检测目的基因产物，结果达到预期。结论：本研究成功构建了大鼠Uqcrfs1基因的重组质粒，该重组质粒可在HEK 293T中过表达。

关键词： 糖尿病肾病 Uqcrfs1基因 重组质粒 临床病理

作者: 孙斯凡 古艳婷 李平

作者单位: 卫生部中日友好医院 南京中医药大学 卫生部中日友好医院 北京协和医学院 100029 卫生部中日友好医院

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2011年学术年会暨2011年国际中西医结合肾脏病学术会议

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 454-455

在线出版日期: 2011-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）