抗病转基因绵羊胚胎生产与移植
目的：建立高效的绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植转基因技术体系。同时，利用睡美人(Sleeping Beauty，SB)转座系统的高效性、Toll样受体(Toll like receptor，TLR)对广谱抗病能力的开关调节作用及沉默口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1基因表达的特性，构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体，通过显微注射技术进行抗病转基因绵羊的生产。方法：首先完成抗口蹄疫病毒RNAi靶点筛选、TLR4基因克隆、睡美人转座子结构的改造和转座酶的优化，然后构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体，筛选高效的绵羊超数排卵方案，最后通过人工授精、显微注射，胚胎移植生产抗病转基因绵羊。结果：本研究采用CIDR+FSH减量+PMSG方案进行超数排卵，平均冲取可用原核胚数为12.95枚；显微注射后移植平均妊娠率为50.98%，产羔率167.9%；注射TLR4基因PCR阳性率为66.70%；注射VP1基因(普通载体)后代阳性率为38.80%；两基因混住时TLR4阳性为33.33%，VP1阳性为58.33%；在北京、天津两地，注射VP1基因(睡美人载体)后代阳性率分别为50.00%、57.14%。结论：本研究显著提高了绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植的效率并批量获得了转TLR4及VP1 RNAi转基因绵羊。
绵羊繁殖 胚胎移植 转基因技术 抗口蹄疫病毒 睡美人转座系统
刘国世 徐静 张金龙 张效生 冯建忠 连正兴 汪锋 柴孟龙 田秀芝 邓守龙 韩红兵 张运海 张璐 卓志勇
中国农业大学,北京 100193 天津市畜牧兽医研究所,天津 300112 安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥 230036
国内会议
成都
中文
54-61
2011-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）