SAHA对间MSCs向心肌细胞分化诱导的促进作用及其机制
目的：探讨异羟肟酸(SAHA)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)是否促进其向心肌细胞分化。探讨SAHA体外诱导MSCs的组蛋白乙酰化机制，并探讨组蛋白乙酰化酶4(HDAC4)是否在此过程中起关键作用。方法：体外培养大鼠MSCs，分别以SAHA、5-aza或SAHA+5-aza诱导其向心肌细胞方向分化。在分化过程中以qPCR、免疫荧光和Western blot检测心肌发育相关基因和蛋白表达。并于SAHA诱导MSCs7天后收集细胞，以乙酰化H3和HDAC4抗体分别做染色质免疫共沉淀(ChIP)。结果：MSCs经SAHA诱导7天后心肌相关基因GATA4,NKx2.5和MEF2c表达明显增加，呈剂量依赖性。在用SAHA+5-aza诱导MSCs后GATA4、NKx2. 5和MEF2c表达与单用SAHA诱导相似。于诱导4周后Western blot检测心肌特异蛋白cTnT表达增加，以1uM SAHA诱导组增加最高。免疫荧光检测也发现SAHA诱导后MSCs中有cTnT表达。5-aza诱导后MSCs中cTnT表达较SAHA诱导组低。对照SAHA与SAHA+5-aza诱导组各cTnT表达量无显著差异。1uM SAHA诱导后MSCs中以乙酰化组蛋白H3抗体ChIP沉淀的GATA4, MEF2c和NKx2. 5启动子区DNA比未诱导MSCs明显增加，而以HDAC4抗体沉淀的启动子区DNA比未诱导MSCs明显下降。结论：1.SAHA能促进MSCs向心肌细胞分化，使MSCs中心肌相关基因和蛋白GATA4、NKx2.5, MEF2c和cTnT表达明显升高。其诱导MSCs向心肌细胞分化效果强于单纯5-aza诱导。2.在MSCs向心肌细胞分化过程中未发现SAHA和5-aza的协同作用。3.SAHA诱导后MSCs的GATA4、MEF2c和NKx2.5表达增加可能是与SAHA诱导后这些基因启动子区组蛋白乙酰化水平增加激活转录有关。4.HDAC4可能是造成GATA4、MEF2c和NKx2.5启动子区组蛋白乙酰化水平增加的关键因素之一。
异羟肟酸 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 诱导分化
冯川 田杰 朱静 赵莉莉 孙慧超
重庆医科大学附属儿童医院心脏中心 400014 重庆医科大学儿科研究所 400014
国内会议
重庆
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219-219
2010-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）