CHO细胞DNA国家标准品的研制
目的：建立CHO细胞DNA残留量定量测定用国家标准品。<br> 方法：使用QIAGEN Genomictip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了CHO细胞基因组DNA作为标准品原料，通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定后分装，采用紫外分光光度法对我国第一批CHO细胞DNA国家标准品进行协作标定，并评价其稳定性和适用性。<br> 结果：CHO细胞DNA国家标准品经检测， A260/A280 均在1.7～1.9 之间，电泳图谱只有单一条带，符合规定。该标准品经6 家实验室协作标定共90 次，几何平均含量为93.63μg·mL-1，平均含量的95％可信区间为92.86-94.40μg·mL-1，单次测定的95%参考值范围为86.51-100.89μg·mL-1，平均可信限率为0.81%。加速热稳定实验表明该标准品在-20℃、4℃、25℃、37℃条件下放置4 个月，DNA含量无明显改变，但37℃条件下 A260/A280 有下降趋势；-20℃、4℃、25℃条件下电泳结果为单一条带，37℃条件下DNA有降解条带。-20℃贮存1 年的长期稳定性结果显示标准品DNA浓度及OD260/OD280 无显著性差异，电泳条带单一，因此-20℃条件下长期保存标准品稳定性较好。在标准品适用性研究中，利用该标准品进行荧光染色法测定，标准曲线R2值为0.99 以上，在0.781-100ng·mL-1之间线性良好，各稀释度CV均小于10%；利用该标准品进行定量PCR法测定，标准曲线R2值为0.99 以上，在10-2～ 103pg之间线性良好，熔解曲线可见单一峰出现。<br> 结论：该批CHO细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求，可作为国家标准品用于荧光染色法和定量PCR检测CHO细胞DNA残留量，含量定为 93.63μg·mL-1，批号为270026-201101。
CHO细胞基因组 国家标准品 DNA残留量 紫外分光光度法 定量PCR法
王兰 高凯 范文红 毕华 付志浩 李永红 饶春明
中国食品药品检定研究院重组技术产品室,北京,100050
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2011-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）