高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定
为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆，本实验根据PRRSV HuN4株基因组序列设计并合成PRRSV特异性引物，应用RT-PCR技术分6段扩增了PRRSV HuN4株全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆于pBlueScript II SK(+)载体中构建了感染性重组质粒pHuN4。并在病毒cDNA 5’末端引入sp6启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本，在3’末段Poly(A)尾引入NotI酶切位点用于线性化pHuN4；此外，将HuN4基因组第14 680位的A沉默突变为G产生一个MluI酶切位点作为鉴定拯救病毒的分子标记。pHuN4通过酶切线性化后经体外转录及转染BHK细胞，并在Marc-145细胞中救获病毒。结果显示：救获的病毒能够在Marc-145细胞上引起明显的细胞病变；间接免疫荧光检测以及分子标记验证结果证明病毒拯救成功，而且拯救的病毒与亲本强毒生长曲线没有显著差异。利用拯救的第5代克隆病毒株对本动物进行致病性试验，结果显示试验猪在感染后第3 d开始出现体温升高、厌食、消瘦等临床表现，发病率达100％，在感染后20 d内陆续死亡，表明拯救的病毒保持了与亲本病毒株相一致的致病特征，以上研究证实我们成功的构建并获得PRRSV强毒HuN4株感染性克隆，为从基因水平上研究PRRSV的致病机制提供了技术平台。
猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性分子克隆 特异性引物 致病特征
张善瑞 周艳君 朱建平 童武 姜一峰 童光志
中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室,上海 200241
国内会议
上海
中文
1-12
2011-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）