脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达及炎性因子分泌的影响α
(0) 目的：探讨脂多糖刺激大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞Toll样受体4(TLR4)，髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA表达和炎性因子分泌的影响，以及MD-2小干扰RNA(MD-2 siRNA)对脂多糖刺激下NR8383细胞炎性因子分泌的作用。<br> 方法：体外培养NR8383细胞，以不同浓度脂多糖 (0.01～10 mg/L)刺激2 h，以1 mg/L脂多糖刺激2～24h。运用脂质体Lipofectamine2000将MD-2 mRNA转染至细胞。半定量RT-PCR方法检测细胞TLR4和MD-2 mRNA的表达，酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量。统计学处理采用单因素方差分析、独立样本；检验和Pearson相关分折。<br> 结果：对照组NR8383细胞TLR4和MD-2 mRNA的相对表达量分别为0.52±0.05和0.44±0.09，0.01mg/L浓度脂多糖刺激酶后表达量无明显改变，0.1mg/L浓度时表达增加，随脂多糖浓度的升高表达量进一步增加，10mg/L刺激后相对表达量分别为0.72±0.06和0.65±0.10(F=17.26、6.24，P<0.01)；TNF-α、IL-6和IL-1β含量具有类似改变趋势，对照组分别为(25.8±3.4)ng/L、(62.4±4.7)ng/L和(31.6±1.7)ng/L；在10 mg/L脂多糖刺激下分别增加至(58.9±5.3)ng/L、(96.5±3.9)ng/L和(55.4±5.4)ng/L(F=29.55.54.47、31.45，P<0.01)。在1mg/L脂多糖刺激下，TLR4和MD-2 mRNA的表达量在2 h后明显增加，6 h达高峰，8 h开始回落，至24 h时仍高于基础值(F=5.28、4.11，P<0.01)；TNF-α、IL-6和IL-1β含量具 IL-6含量在8 h达高峰.持续至12 h。TLR4和MD-2 mRNA表达呈正相关(r=0.513.P<0.01)。MD-2 siRNA对NR8383细胞MD-2基因的干扰效率为67％，在脂多糖刺激下干抗组细胞培养上清液中 TNF-α、IL-1β和IL-6水平未见明显升高。<br> 结论：高浓度脂多糖可较长时间上调大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞TL-R4和MD-2基因的表达，并促进TNF-α，IL-6和IL-1β的分泌。MD-2 siRNA可抑制脂多糖刺激下NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6。
Toll样受体4 肺泡巨噬细胞株 髓样分化蛋白-2 脂多糖 炎性因子分泌
任卫英 朱蕾 华峰 金建军 蔡映云
200035 上海，复旦大学附属中山医院老年科 200035 上海，复旦大学附属中山医院呼吸科 200035 上海，复旦大学附属中山医院中心实验室
国内会议
上海
中文
72-77
2011-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）