表达牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因重组腺病毒的构建及动物免疫

摘要：

　　本研究提取牛源犬新孢子虫基因组DNA，应用PCR技术扩增犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS2和致密颗粒蛋白基因NcGRA7，SOE-PCR技术拼接NcSRS2和NcGRA7基因，构建重组克隆质粒pMD18-NcSRS2-NcGRA7、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2.NcGRA7及重组腺病毒表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2-NcGRA7，脂质体介导转染QBI-HEK293细胞，包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7，PCR检测重组腺病毒NcSRS2-NcGRA7融合基因，IFAT和Western blotting检测NcSRS2-NcGRA7融合基因在QBI-HEK293细胞中的表达，TCID50法测定病毒滴度后，接种BALB／c小鼠，间接ELISA检Nd,鼠血清IgG抗体水平，细胞因子ELISA试剂盒检测小鼠血清IFN-γ、IL-4水平。结果，拼接的牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因大小为1463bp，与GenBank中发表的序列(AF061249、AF176649)同源性为99％；重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7在QBI-HEK293细胞中包装成功，表达融合蛋白的分子量约为51ku，具有较好的反应原性；测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7滴度为109TCID50／mL；ELISA检测三免后3周的BALB／c小鼠血清中IgG抗体效价达1：4096，细胞因子IFN-γ、IL-4水平与对照组比较差异极显著(p<0.01)。本研究为牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词： 牛源犬新孢子虫 表面蛋白 融合基因 腺病毒 动物免疫 构建体系

作者: 张守发 贾立军

作者单位: 延边大学农学院动物医学系,吉林,延吉,133002

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

会议地点: 武汉

会议语种:中文

页码: 8-15

在线出版日期: 2011-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）