双抗体夹心ELISA检测大片形吸虫分泌排泄抗原方法的建立
用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。
大片形吸虫 分泌排泄抗原 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 检测方法
李晓栩 刘如明 陈汉忠 孟盟 曹池 王俊华
广西大学动物科技学院,广西南宁,530005
国内会议
中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会
武汉
中文
139-151
2011-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）