人3,4,7型三价重组腺病毒的构建
目的：研制人3，4，7型三价重组腺病毒的多价基因工程疫苗。方法：利用本实验室保存的重组pBR22-ADV3-EGFP质粒作为骨架，将生物信息学预测得到的ADV7和ADV4的中和表位，分批通过BJ5183体内同源重组的方法替换至pBR22-ADV3-EGFP的六邻体上。鉴定正确的阳性重组质粒经限制性内切酶AsisI酶切释放重组腺病毒基因组，再将基因组转染至AD293细胞中进行病毒包装。结果：将预测得到的ADV7 4个中和表位分别重组至pBR22-ADV3-EGFP六邻体上，得到PBR322-MHl-ADV3EGFP, PBR322-MH2-ADV3EGFP, PBR322-MH5-ADV3EGFP和PBR322-MH7-ADV3EGFP 4种重组质粒；以PBR322-MH5-ADV3EGFP为骨架，将ADV4的4个中和表位分别重组至其上，得到PBR322-HVRl-MH5-ADV3EGFP, PBR322-HVR2-MH5-ADV3EGFP, PBR322-HVR5-MH5-ADV3EGFP和PBR322-HVR7-MH5-ADV3EGFP 4种重组质粒。分别将这8种质粒中的腺病毒基因组酶切释放后转染AD293细胞，MHl , MH2, MH5和MH7 4株ADV7-ADV3重组病毒成功包装。HVRl, HVR2, HVRS, HVR7 4株ADV4-ADV7-ADV3重组病毒暂未成功包装，但其转染细胞与ADV3六邻体特异mAb的WesternBlotting结果显示，重组病毒基因组在细胞内部能够转录并表达六邻体蛋白；而荧光定量PCR结果则显示细胞内腺病毒基因组含量呈现先升高后降低。结论：经PCR及测序鉴定重组病毒MHil, MH2, MH5和MH7的4个中和表位部分己成功被替换为ADV7的表位，为ADV7-ADV3双价疫苗的开发奠定物质基础。而三价重组病毒暂时未获得，实验结果证明基因组转染至细胞中后能够转录和表达，但未知原因导致其基因组与六邻体不能包装，其原因的探究将加深我们对腺病毒在细胞中的基础病毒学的了解。
腺病毒 三价重组 双价疫苗 荧光定量
李潇 周志超 邱红玲 唐妮 田新贵 李海涛 周荣
广州医学院第一附属医院 510120 上海生命科学研究院营养科学研究所
国内会议
2011中华医学会呼吸病学年会暨第十二次全国呼吸病学学术会议
广州
中文
670-671
2011-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）