STIM1/Orai1介导的钙离子内流参与气道平滑肌细胞增殖
目的：本研究将探讨STIM1和Orail介导的SOCE是否参与了大鼠气道平滑肌细胞增殖。方法：将雄性SD大鼠支气管平滑肌组织在解剖显微镜下分离，消化酶消化，然后加入含10%胎牛血清的DMEM培养基置于培养瓶中进行体外原代细胞培养，3-6代细胞用于实验研究。采用Fluo-3/AM荧光染料进行胞浆内钙离子染色，然后用激光共聚焦系统观察胞浆内荧光强度实时变化，测定细胞内钙浓度变化情况。TRIzol法提取细胞总RNA，采用实时定量逆转录PCR方法检测目的基因mRNA相对宁量表达。结果：研究发现(1)血清刺激的增殖期气道平滑肌细胞与无血清刺激的静止期细胞相比，毒胡萝卜素(Tapsigargin.TPG)激发的S0CE明显增强，并且同时伴有STIM1 mRNA表达轻度上调和Orail mRNA表达明显上调。(2) SOC通道阻断剂SKF-96365可以呈剂量依赖性的抑制TPG激发的气道平滑肌细胞SOCE与血清诱导的细胞增殖。SKF-96365 (10 μ M)，Ni2+ (100 μM)和BTP-2 (100 nM)可以部分抑制血清诱导的气道平滑肌细胞增殖。(3)特异性shRNA进行RNA干扰可以特异性抑制ST工M1和Orail mRNA水平和蛋白水平表达。(4) STIM1或Grail基因沉寂后，血清诱导的增殖期气道平滑肌细胞SOCE下降，并且血清或PDGF-BB诱导的细胞增殖速率也下降。沉寂STIM1和Grail mRNA后，SOC通道阻断剂SKF-96365对血清或PDGF-BB诱导的气道平滑肌细胞增殖不再有抑制作用。结论：STIM1/Orail参与了气道平滑细胞SOCE的产生和调控，SOCE参与了气道平滑肌细胞钙稳态的调控，并在气道平滑肌细胞增殖过程中发挥重要作用。
STIM1/Orai1介导 支气管哮喘 气道平滑肌 细胞增殖
邹进晶 高亚东 耿爽 杨炯
武汉大学人民医院呼吸科 430061 武汉大学中南医院呼吸科 武汉大学中南医院呼吸科
国内会议
2011中华医学会呼吸病学年会暨第十二次全国呼吸病学学术会议
广州
中文
793-794
2011-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）