大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的构建与鉴定

摘要：

　　目的：构建大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，并在细胞水平鉴定其可调控效率。方法： 将前期构建好的含大鼠PKCγ基因的shRNA干扰序列从质粒pLVTHM酶切和含tet-on可调控序列从质粒pLVPT-tTR-KRAB酶切后连接，连接后的新质粒包装成慢病毒后感染C6细胞，筛选出感染慢病毒的C6细胞经不同浓度的强力霉素诱导后，用免疫印迹技术(westem blot)检测PKCγ基因的蛋白表达水平的改变以评价慢病毒载体的可调控效率。结果：测序证实成功构建了大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，感染C6细胞后经强力霉素诱导可以依递增浓度梯度递降PKCγ蛋白的表达。结论：成功构建大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，且慢病毒载体可被强力霉素诱导而特异高效地抑制PKCγ基因的表达。

关键词： 蛋白激酶Cγ 可调控shRNA干扰 慢病毒 载体构建

作者: 刘峰 肖兴鹏 田玉科

作者单位: 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科教研室,武汉,430030

会议类型: 国内会议

会议名称: 2011年全国医药学术论文交流会

会议地点: 太原

会议语种:中文

页码: 109-111

在线出版日期: 2011-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）