结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定
目的：构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体，经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白，并研究其抗原性。方法：用PCR扩增M.tbrv2352e基因，克隆入pET30a(+)质粒，构建pET30a(+)：rv2352c重组质粒，阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白，通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔，制备抗Rv2352c抗血清，抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)，取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法，检测抗体特异性。结果 ：经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确，SDS-PAGE和Western blot结果显示，在45 kD处呈现单-蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白，有较强的免疫原性。结论：成功构建原核表达重组质粒pET30a(+)：rv2352c，制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能，为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。
结核分枝杆菌 rv2352c基因 重组蛋白质 抗原活性 克隆表达
曹廷明 杜博平 马玙 张宗德 贾红彦 古淑香 郑晓静 李自慧 杜凤娇 刘洋 刘忠泉 邢爱英
北京市结核病胸部肿瘤研究所 北京 101149 北市结核病胸部肿瘤研究所 北京 101149
国内会议
上海
中文
166-173
2010-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）