丙硫咪唑对家蚕微孢子虫β-tubulin基因表达抑制作用的研究
丙硫咪唑能够特异性结合在微孢子虫的β 微管蛋白基因上，抑制β 微管蛋白与α 微管蛋白组装微管或使已组 装的微管解聚，使纺锥体不能形成，从而抑制细胞的有丝分裂。为了从分子生物学角度验证丙硫咪唑对家蚕微孢子 虫治疗作用的效果，阐明其药理机制，本文选用家蚕品种P50 为实验对象，采取2 种不同处理方式(1、接种家蚕微 孢子虫(Nosema bombycis) 2、接种N. bombycis后再添食丙硫咪唑)，在6个不同时段(丙硫咪唑处理后6h、18h、30h、 42h、66h、90h)分别取中肠组织，以家蚕β-actin基因为内参基因进行不同样品之间mRNA量校正，分析家蚕微孢子 虫β-tubulin 基因相对表达量差异。提取中肠组织总RNA 后，检测其质量和浓度，然后去基因组DNA，再反转录成 cDNA，再用PCR检测模板质量，最后用实时荧光定量PCR检测和分析结果，建立SYBR Green实时荧光定量PCR 基因相对定量表达技术平台。结果表明：PCR 内参基因和目的基因只有特异性目的条带，溶解曲线呈单峰，无基因 组DNA污染，扩增效率在80％-120％之间，用2-△△Ct法计算得到在中肠中随着时间增长，添食丙硫咪唑的家蚕β-tubulin 基因表达量相对于只添食家蚕微孢子虫的值越来越小，在90h达到最低为0.004，抑制作用越来越明显。
丙硫咪唑 家蚕微孢子虫 β-tubulin 基因表达 实时荧光定量PCR
陈大睿 沈中元 唐旭东 徐莉 朱峰 陶恒平 管蕊
江苏科技大学生物与应用化学学院,江苏镇江 212018 江苏科技大学生物与应用化学学院,江苏镇江 212018; 中国农业科学院蚕业研究所,江苏镇江 212018;农业部蚕桑遗传改良重点开放实验室,江苏镇江 212018 中国农业科学院蚕业研究所,江苏镇江 212018
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1900-01-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）