Micr0RNA let-7f对1型糖尿病内皮祖细胞介导的血管新生的作用
目的：该研究旨在探讨miRNA let-7f对糖尿病EPCs介导的血管新生的调节作用。<br> 方法：⑴动物模型野生型C57BL／6雄性小鼠(8-10周龄)，连续五天腹腔注射60mg／kg链脲佐菌素，对照组小鼠注射枸橼酸钠缓冲液。末次注射后3-4天测定血糖浓度，筛选出血糖在280mg／dL以上者作为1型糖尿病动物模型，待血糖持续升高4-6周后用于实验。⑵EPCs的分离培养无菌分离实验小鼠股骨、胫骨、髋骨及肱骨，收集骨髓单个核细胞。将细胞按照1×106／cm2的密度接种在已包被玻连蛋白的六孔板中，置于37℃，5％CO2中培养。培养4天后第一次完全换液，以去除未贴壁的细胞后继续培养3天，即可用于实验。⑶EPCs的功能检测通过检测小管形成试验、细胞黏附试验和细胞迁移实验检测EPCs的小管形成能力、黏附能力及迁移能力。⑷Real-time PCR使用mirVanaTMmiRNA提取试剂盒提取EPCs中的miRNAs，并用Taqman microRNA反转录试剂盒进行反转录，最后使用Taqman miRNA引物和TaqManUniversal PCR Master Mix检测EPCs中let-7f的表达，并以snoRNA55作为内参照。⑸Let-7f模拟物和抑制物的转染利用DharmaFECT转染试剂I对EPCs分别转染let-7f模拟物、抑制物以及各自的随机对照。<br> 结果：①MiRNA let-7f在1型糖尿病小鼠EPCs中的表达水平显著降低。与正常对照组小鼠分离培养的骨髓EPCs相比，1型糖尿病小鼠EPCs中miRNA let-7f的表达水平明显降低(n=6，P<0.05)。②MiRNA let-7f改善1型糖尿病小鼠EPCs受损的功能。通过模拟物转染使let-7f在糖尿病EPCs内过表达，糖尿病EPCs受损的功能明显改善，表现为小管形成、黏附和迁移能力的增加。相反，在正常EPCs中转染let．7f抑制物后其正常表达被抑制，正常EPCs形成小管的能力、黏附和迁移能力则明显下降。(n=4，P<0.05)。<br> 结论：MiRNAlet-7f对改善1型糖尿病小鼠EPCs的功能有重要作用，调控EPCs中let-7f的表达可能是增强EPCs疗效的有效策略。
1型糖尿病 血管新生 骨髓细胞 细胞病理学
王晓荣
北京博爱医院心内科
国内会议
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2011-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）