葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达与纯化及性质鉴定
α葡聚糖酶在食品,医疗和制糖等行业上都有着广泛的应用前景。本研究首先从油脂酵母中克隆了葡聚糖酶DEX基因,构建入表达载体pPIC9k-His6中,然后在AOX1启动子的控制下,在毕赤酵母Gs115菌株中表达。通过在5L罐中107h的发酵,重组P．pastoris Mut+菌株的湿重达到 588．6g／L,萄聚糖酶的浓度和酶活分别达到0．445 g／L和83900 U/L。通过一步阳离子交换层析,收率为71．61％,酶比活为181．96 U／mg,纯化倍数为17．56倍。纯化得到的葡聚糖酶经过SDS—PAGE和western blotling检测,均显示为单一的带,说明通过离子交换一步纯化可得到电泳纯葡聚糖酶。纯化后的葡聚糖酶最适温度为30 ° C,最适pH为4．5。金属离子Al3+,Cu2+和Fe3+,及SDS能够完全抑制葡聚糖酶的活性,而Mg2+能够增强葡聚糖酶活性145％。
周祥山 陈琳 张元兴 范卫民 陆建
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海
国内会议
天津
中文
172-175
2008-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）