利用低温显微镜对斑马鱼精子最佳冷冻速率的筛选
本研究运用低温显微镜结合SYBR/PI双染色法,分析斑马鱼精予在不同冷冻速率和不同温度段精膜的破损率,并以此为依据筛选出最佳冷冻速率,最后用程序冷冻仪冷冻加以验证。结果表明,以8％DMSO租4％MEOH为抗冻剂,用不同冷冻速率(-1、-25、-65、-100、-130℃/min)将精子从4℃分别冷冻到-10℃、-20℃、-30℃,随后再解冻回升至35℃时,以-25～-130℃/min速率冷冻到-10℃和-20℃再解冻回升到35℃时的PI为15％～20％,均显著低于相对应的-1℃/min冷冻速率的PI。当冷冻至-30℃后再解冻回升至35℃时,各速率下8％DMSO的PI均显著低于4％MEOH的,其中以8％DMSO和-25℃/min的PI最小,为24±1.7％。以-5、-25、-65、-100、-130℃/min的速率将精子从4℃直接冷冻到-80℃,再解冻回升至4℃或35℃时,以8％DMSO为抗冻剂和-5℃/min为冷冻速率所得到的PI最低,约为48％。由此可见,斑马鱼精子膜在冷冻阶段和解冻阶段均会发生膜的损伤,但以8％DMSO为抗冻剂和-25℃/min速率将精子从4℃冷冻至-30℃,再以-5℃/min的速率从-30℃冷冻到-80℃的方案最佳。以此为冷冻方案,用程序冷冻仪验证,结果表明这一复合冷冻方案的冻融精子的膜损伤率仅为28％,精于活力最高可达53％,比已有冷冻方案所获得的冻融精子活力提高了近两倍。
斑马鱼 低温显微镜 超低温冷冻保存 精子膜完整性
王小花 刘静 赵恩慧 白承连 黄长江 董巧香
水域生态与环境科学研究所,温州医学院,温州 325035
国内会议
上海
中文
25-31
2010-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）