禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的设计与构建
多表位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合，从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势;可以有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素，多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口，为了探讨多表位核酸疫苗防治禽传染性支气管炎病(IB)的可能性，本研究以本实验室鸡传染性支气管炎SAIBK株全基因组序列为材料，采用Lasergene软件对IBV结构蛋白进行二级结构分析，抗原表位分析采用Kyte-Doolittle法分析氨基酸序列亲水性、Emini法预测特定区域位于蛋白质表面的可能性、Jameson-Wolf法预测各结构蛋白的抗原指数，综合分预测结果，有针对性的选择能获得最佳免疫保护目的表位：采用Sl糖基化B细胞表位保守序列E1和能有效产生保护性抗体滴S2 N端保守B细胞表位E2;以及能诱导CTL效应N核蛋白C端120残基，表位之间连接采用“AAY”氨基酸序列以提高表位被切割的效率，并通过Lasergene软件分析确保各表位之间独立和完整，将设计好多表位基因序列由上海旭冠生物合成，经过酶切定向克隆pVA×1核酸疫苗载体。并将多表位基因克隆至原核表达载体pGEX4T-1，经过IPTG诱导、超声破碎细胞、GST谷胱甘肽凝胶纯化上清成功获得了多表位纯化蛋白，将多表位纯化蛋白包被ELISA板，用IBV阳性多价血清检测其免疫原性，试验结果初步表明多表位纯化蛋白具有免疫原性，能和多价血清发生交叉反应。综合以上结果，我们初步构建了禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗，为研制高效、安全的IBV多表位核酸疫苗提供理论依据和基础材料。
禽传染性支气管炎病毒 多表位核酸疫苗 细胞免疫 抗原指数
阳泰 王红宁 汪雪 曾瑜红 张有峰 张鹏举 李玉玲
四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成610064 四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心， 四川成都610064 四川农业大学动物医学院 四川雅安 625014
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2008-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）