携带IBV基因真核表达质粒的大肠杆菌工程菌发酵工艺研究
(0) 本研究以本课题组构建的携带禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒(pVA×1-S1、pVA×1-M、pVA×1-N、VR1020-S1、VR1020-M、VR 1020-N)的大肠杆菌工程菌为研究对象，对其发酵工艺进行了研究。采用单因子分析和正交设计，摇瓶发酵对各重组大肠杆菌基因工程菌的培养基条件进行了研究，包括碳源、氮源和无机盐离子的筛选，并在5L发酵罐中扩大培养优化其接种量、培养温度、初始pH及溶氧等培养条件。对发酵液用热激法和碱裂解法两种不同的提取方法进行粗提比较，对碱裂解法进行优化，对裂解时间和裂解反应液的比例进行研究，再用聚乙二醇和硅藻土两种方法进行纯化比较。本研究确定优化了培养基的成份，为12g/L胰蛋白胨，4g/L酵母提取物，10g/L葡萄糖，6ml/L甘油，3g/L NaCl，8g/L Na2HPO4，3g/LKH2PO4。优化了上罐发酵培养条件，为接种量5％、温度42℃、pH7.2、D050％。建立了以碱裂解法粗提，硅藻土法纯化的质粒DNA提纯工艺。该工艺可去除大部分RNA、基因组DNA和蛋白质等杂质，提取的质粒DNA纯度可达到1.88，超螺旋比例达到98.4％，符合世界卫生组织关于质粒产品的质量要求。与传统纯化方法比较，生产成本降低了20-40％。本研究降低了基因工程菌发酵和质粒提取的生产成本，为DNA疫苗的大规模生产提供了理论和实验依据。
禽传染性支气管 大肠杆菌 发酵工艺 质粒DNA 提取工艺
朱麟 王红宁 张有峰 阳泰 汪雪 曾瑜虹 李玉玲 张鹏举
四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成都 610064 四川农业大学动物医学院四川 雅安 625014 四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成都 610064 四川农业大学动物医学院四川 雅安 625014
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2008-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）