表达绿色荧光蛋白伪狂犬基因缺失病毒的构建

摘要：

本文根据Genebank公布的质粒pGFPuv序歹U、质粒pusK序列和PRV基因gG启动子，设计一对含限制性内切酶Pst Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点的引物，以含绿色荧光蛋白基因的质粒pGFPuv为模板，扩增了完整的GFPuv基因，然后用Pst Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后的扩增片段与经Pst Ⅰ和Not Ⅰ双酶切处理的pUSK质粒连接，转化人肠杆菌DH5a，构建了转移重组质粒puSK-pGFPuv。经酶切鉴定与PCR方法证明重组质粒大小正确，且插入了绿色荧光蛋白，并证明插入方向正确。进一步测序鉴定，测序结果表明插入的片段与预期相符。利用脂质体介导的方法，将质粒pUSK-pGFPuv和PRv基因组共转染VERO细胞进行同源重组并观察到荧光，这为筛选和进一步鉴定重组病毒打下了基础，也为构建伪狂犬gG基因缺失疫苗打下基础。

关键词： 伪狂犬病病毒 绿色荧光蛋白 gG糖蛋白 转移载体 同源重组

作者: 项朝荣 李文刚 吴凤笋 唐桂芬

作者单位: 济源市畜牧局,河南 济源 454650 郑州牧业工程高等专科学校,河南 郑州 450011

会议类型: 国内会议

会议名称: 河南省畜牧兽医学会第七届暨2008年学术研讨会理事会第二次会议

会议地点: 郑州

会议语种:中文

页码: 90-94

在线出版日期: 2008-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）