猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

本文根据GcnBank登录的猪附红细胞体(Mycoplasma.Suis)推测的功能性基因ORF2序列设计引物和TaqMan荧光探针，经优化反应条件，建立了M.stuis的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quarttitative teal-time PCR，FQ-PCR)：进行了FO-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性实验，并对疑似M.suis感染临床抗凝全血样品进行了应用检测，同时与普通PCR方法进行了对比实验。结果显示：成功地建立了M.suis的FQ-PCR方法和定量标准曲线，标准曲线的曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系，相关系数为0.998; FQ-PCR方法检测灵敏度可达10个拷贝/μL，比普通PCR灵敏度高100倍;FQ-PCR方法特异性高，对pGEX-T/M.suis重组质粒扩增呈现阳性反应曲线，而对8个对照细菌、病毒和寄生虫DNA扩增曲线均呈现阴件反应;不同浓度的pGEX-T/M.suis重组质粒分别重复扩增2次，重复结果良好：对24份临床疑似M.suis感染样品进行了应用检测，阳性检出率为83.3％，较普通PCR方法阳性检出率高。

关键词： 猪附红细胞体 实时荧光定量PCR TaqMan荧光探针 检测方法

作者: 闫若潜 赵明军 张志凌 张健 盛敏 刘光辉 吴志明

作者单位: 河南省动物疫病预防控制中心,河南 郑州 450008

会议类型: 国内会议

会议名称: 河南省畜牧兽医学会第七届暨2008年学术研讨会理事会第二次会议

会议地点: 郑州

会议语种:中文

页码: 432-434

在线出版日期: 2008-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）