猪链球菌9型荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

本文根据GenBank已登录的猪链球菌9型(SS9)cps9基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针，以定量的10倍系列稀释含cps9H部分基因的T载体重组质粒(pGEX-T-cps9H)为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作了标准曲线，经对荧光定量PCR的反应条件进行优化，建立了SS9型的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taqman FQ-PCR);对所建立的FQ-PCR检测方法进行了敏感性、特异性和重复性实验，并对疑似猪链球菌临床样品进行了应用检测，同时与常规PCR方法进行了对比实验。结果显示：标准曲线的曲线循环阂值与模板浓度有良好的线性关系，相关系数为0.996;所建立的FQ-PcR方法检测灵敏度可达1拷贝/μL，比对照常规PCR灵敏度高100倍;FQ-PCR方法特异性高，对pGEX-T-cps9H蕈组质粒和标准SS9株扩增曲线均呈现阳性反应，而对6个对照细菌和寄生虫DNA及SS2、SS7、SS1等三个标准链球菌株DNA扩增曲线均呈现阴性反应;对小同浓度的pGEX-T-cps9H重组质粒分别重复扩增4次，重复性良好;用该方法对11份临床疑似猪链球菌感染猪组织病料进行了应用检测，结果有3份样品为阳性，与常规PCR检测方法的阳性符合率为100％。

关键词： 猪链球菌9型 实时定量PCR TaqMan荧光探针 检测方法

作者: 张健 拜廷阳 闫若潜 赵明军 盛敏 吴志明

作者单位: 河南省动物疫病顶肪控制中心,河南 郑州 450008 西北农林科技大学动物科技学院,陕西 杨凌 712100

会议类型: 国内会议

会议名称: 河南省畜牧兽医学会第七届暨2008年学术研讨会理事会第二次会议

会议地点: 郑州

会议语种:中文

页码: 435-437

在线出版日期: 2008-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）