血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白的克隆、表达及鉴定
目的：在毕赤酵母中高效分泌表达血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白并鉴定其活性. 方法：用PCR方法克隆人血清白蛋基因，将其C端与PTH(1-34)基因的N端相接，构建重组表达质粒pPIC9-HSA-PTH(1-34).线性化表达载体转化毕赤酵母宿主菌GS115，对阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达。采用经典的腺苷酸环化酶刺激活性检测法确定HSA-PTH(1-34)的生物学活性。 结果：重组毕赤酵母分泌HSA-PTH(1-34)的表达量可达400mg/L，分子量与理论值相似，约为70kDa.免疫印迹显示目标蛋白可与抗HSA多抗、抗PTH(1-34)多抗有良好的特异性杂交反应.体外活性实验证明HSA-PTH(1-34)能够激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶，但活性低于PTH(1-34)标准品. 结论：成功表达出具有生物学活性的血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白HSA-PTH(1-34)，为进一步研究应用打下基础.
血清白蛋白 PTH(1-34)融合蛋白 毕赤酵母
陈静 陈枢青
浙江大学药学院生物制药研究室,浙江 杭州 310031
国内会议
黄山
中文
22-27
2006-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）