不同毒力结核杆菌的纯化蛋白质衍生物(PPD)对人巨噬细胞凋亡的诱导及其与Toll样受体-2的相关性
(0) 实验目的:本实验通过两种不同毒力结核杆菌的纯蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞(THP-1)凋亡的差异及其与Toll样受体-2(TLR-2)相关性进行初步研究。方法:分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白(H37Rv-PPD)和低毒力结核杆菌衍生蛋白(BCG-PPD)在3h、8h、15h及24h刺激分化成熟的THP-1细胞;应用Hocost染色染色法，荧光镜下观察细胞凋亡及坏死情况.通过流式细胞仪检测细胞annexin V蛋白以判定凋亡情况、TLR-2表达情况;加入TLR-2阻断剂后，用上述方法，流式测定细胞表面TLR-2的阻断效果及凋亡情况.结果:(1)由Hochest染色法可见,BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见，而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状.(2)BCG-PPD刺激下凋亡率随时间升高,在24小时点凋亡比例高达30.2％,而同时间点测TLR-2的比例为8.84％;应用TLR-2阻断剂后，每个时间点TLR-2表达比例均在3％以下(与对照比例相当),对应时间点凋亡比例均下降,24小时时凋亡比例仅为10.5％.3)在高毒力菌株的外分泌蛋白(H37Rv-PPD)可引起Toll样受体2(TLR-2)高表达,24小时TLR-2表达率达17.2％,该点凋亡率仅为7.72％;TLR-2阻断后,TLR-2表达率在对照波动范围内,但凋亡率与TLR-2未阻断前比例相比,变化不大.结论:(1)BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡,且这种凋亡与TLR-2有一定的相关性;而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死.(2)H37Rv-PPD激活了TLR-2的高表达却不能诱发THP-1凋亡,而诱发THP-1发生坏死，可能与TLR-2的“双向”作用有关.
结核杆菌 纯化蛋白质衍生物 人巨噬细胞 Toll样受体-2
史会连 虞胜镭 路蝉伊 张文宏 陈澍
上海复旦大学附属华山医院感染科 200040
国内会议
重庆
中文
77-79
2010-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）