猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达
(0) 目的: 克隆猪Fc受体γ亚单位基因，构建原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备多克隆抗体。方法:研究中应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪Fc γ亚单位的cDNA序列，测序结果表明得到了与预期相符的长为299bp基因序列片段并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中，构建重组表达质粒pET-FcRγ，成功表达了分子量大小约为29KDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小白鼠，制备鼠抗FcRγ-His重组蛋白的多克隆抗体，用间接ELISA和Westem blotting检测获得的多克隆抗体，ELISA测定多克隆抗体的效价为1：8000。Westem blotting。结果：显示制备的多克隆抗体可以与重组蛋白特异性结合，表明重组蛋白具有较好的免疫原性结果成功构建猪Fc受体γ亚单位原核表达载体，纯化到融合蛋白FcRγ-His，用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论: 成功克隆猪Fc受体γ亚单位基因，成功获得了猪Fc受体γ亚单位表达受体，为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。
猪FcRγ 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
张志远 徐红运 刘肖萍 卢晓艳 段二珍 刘玉松 夏平安 崔保安
河南农业大学牧医工程学院，郑州，450002
国内会议
郑州
中文
771-777
2010-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）