猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行，对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置，结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定，以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响。结果表明：(1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLgaglerD对MARC-145细胞无感染性，且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLeaderR能拯救出突变病毒，但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变，由此证明TRS-L 3’的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能。(2)突变TRS123 3’最后两个碱基的pM7Da或突变TRS93’最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒，而共同含有TRS9和TRS123 3’最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒，对拯救的突变病毒进行鉴定发现，TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复，而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒，但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零，且vM7S3滴度偏低。由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSVsgmRNA7的转录调控及其3’一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译。(3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点础基均来源于TRS-B，为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 转录调控序列 TRS鉴定 功能解析
郑海红 孙志 朱兴全 袁世山
中国农业科学院上海兽医研究所 动物传染病研究室 农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232 华南农业大学兽医学院 广东 广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所 动物传染病研究室 农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232 华南农业大学兽医学院 广东 广州 510642
国内会议
郑州
中文
158-165
2010-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）