应用化学合成siRNA抑制猪瘟病毒增殖的研究
本研究针对猪瘟病毒三个基因，设计6个RNA干扰靶点，2个针对Npro基因、1个针对NS2基因和3个针对NS3基因。首先由公司合成以上干扰耙点的siRNA分子，将化学合成的siRNA分子转染PK-15细胞单层6 h，转染完成后接种猪瘟病毒石门株(96孔板200 TCID50/孔，12孔板2000 TCID50/孔)，培养48 h和72 h，采用间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒感染滴度测定三种方法对siRNA分子抑制猪瘟病毒增殖水平进行了研究.间接免疫荧光结果显示转染siRNA分子的细胞荧光比例显著低于对照，72h荧光比例略高于48 h，其中NS3-1，NS3-2和NS3-3的荧光比例最少。转染各个siRNA分子(N8、N9、NS2-1、NS3-1.NS3-2和NS3-3)的细胞感染猪瘟病毒48 h后对猪瘟病毒基因组的抑制率分别为68.0％，71.1％、78.3％、85.5％、95.1％、84.7％：感染病毒72 h后抑制率分别为19.4％、61.3％、42.4％、77.3％、74.2％.60.1％，其中NS3-1和NS3-2高效抑制猪瘟病毒基因组的复制.转染组病毒感染滴度低于对照组，72 h病毒感染滴度高于48 h，其中NS3-1、NS3-2和NS3-3干扰组病毒滴度低于对照1-2个数量级。结果表明本研究筛选出的NS3-1和NS3-2靶点能高效抑制病毒增殖，为应用RNAi技术进行抗猪瘟病毒研究提供有效的候选靶点，为猪瘟病毒的防治进行基础性研究。
猪瘟病毒 RNAi 化学合成siRNA
李江南 郭换成 涂长春
军事医学科学院军事兽医研究所 吉林 长春 130062
国内会议
郑州
中文
317-321
2010-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）