副猪嗜血杆菌重组P2蛋白表达与ELISA抗体检测方法的建立
本文根据GenBank中副猪嗜血杆菌(HPS)的P2蛋白基因序列，设计合成1对特异性引物，用P2-PCR方法从HB070214株中克隆了大小为1077bp的P2蛋白基因。将P2蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-P2，在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为60500的可溶性融合蛋白P2-His；经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析，融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的30％.将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱，经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱，其纯度可达92.5％.用Westernblotting分析纯化后的融合蛋白，显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化EL ISA反应条件，建立了可检测抗HPS P2蛋白抗体的间接ELISA 方法(P2-ELISA)，并将所建立的P2-ELISA与国外进口的HPS检测试剂盒Synhiocits-ELISA对196份临床送检血清进行平行检测，阳性符合率为93.4％。结果表明，本试验建立的P2-ELISA与Synbiocits-ELISA具有同样高的特异性。
HPS P2蛋白 原核表达 ELISA抗体检测
李鹏 姜平
长江大学动物科学学院,荆州,湖北 434025 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,江苏 210095
国内会议
长春
中文
1292-1298
2010-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）