会议专题

秦川牛Nrampl基因N端序列的原核表达及纯化

目的:为了研究牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1(Nrampl)的功能,探寻转基因抗胞内感染菌牛新材料创制的功能基因. 方法:本试验使用BepiPred 1.Ob Server软件对Nrampl基酸序列分析后,应用RT-PCR方法从泰川牛外周血巨噬细胞扩增出Nrampl编码基因N端序列,并将其克隆到pMD18-T simple载体,酶切后连接于pGEX-4T-1表达载体,命名为pGEX-N2。将重组质粒pGEX-N2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测GST-Nramp1-N融合蛋白表达,并筛选最佳诱导条件,用谷胱甘肽Sepharose4B介质分离纯化该融合蛋白. 结果:结果表明,牛Nrampl N端编码序列长186 bp,存在一个碱基突变.用0.1mmol/L IPTG,于35℃条件下,诱导10 h在大肠杆菌中高效表达,且表达产物为可溶性蛋白。 结论:试验克隆了秦川牛Nrampl基因N端序列,构建了其表达重组质粒pGEX-N2,获得纯化的GST-Nrampl-N融合蛋白,为进一步研究牛Nrampl功能及转基因抗病牛的培育奠定了基础.

天然免疫力 巨噬细胞蛋白1 原核表达 蛋白纯化 秦川牛

李倩 徐晓彬 陈华涛 王爱华 张涌 靳亚平 马延森

西北农林科技大学动物医学院,农业部动物生殖生理和胚胎工程重点开放实验室,杨凌,712100

国内会议

中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会

长春

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451-458

2010-08-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)