地黄多糖对大鼠脂肪间充质干细胞向心肌细胞诱导分化的影响
目的：分离培养大鼠脂肪间充质干细胞(adiposetissue—derived mesenchymal stem cells，ADMSCs)，观察地黄多糖对大鼠ADMSCs生物学性状的影响，以及地黄多糖对大鼠ADMSCs向心肌细胞转化率的影响。 方法：取体重约200g的Wistar雄性大鼠，无菌条件下取双侧附睾处脂肪，用酶消化法分离获得细胞，含10％胎牛血清的DMEM培养基培养、传代。选取第3代大鼠ADMSCs应用免疫组织化学染色方法，检测其表面分子CD13．CD44．CD105．CD31．CD45等的表达。采用不同浓度地黄多糖(终浓度分别为0 mg／L、1mg／L、50 mg／L、100 mg/L、200mg／L)干预第3代大鼠ADMSCs，消化计数法测定接种后2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h不同时间点的细胞贴壁率，MTT法绘制各组细胞生长曲线。应用浓度为10umol／L的5-氮胞苷诱导第3代大鼠ADMSCs24小时后，加200mg／L的地黄多糖干预培养4周，免疫组化染色法检测α-actin的表达，流式细胞仪检测大鼠ADMSCs向心肌细胞的转化率。 结果：大鼠附睾处脂肪中含有大量ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定CD13．CD44．CD105阳性，CD31．CD45阴性。大鼠ADMSCs接种后24小时贴壁率达95％，地黄多糖对大鼠ADMSCs的贴壁率无明显影响。第3代大鼠ADMSCs具有活跃的增殖能力，细胞生长曲线均呈S型，前48小时为潜伏期，3～5天为对数生长期，第6天起逐渐进入生长平台期，加不同浓度地黄多糖干预后，大鼠ADMSCs的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性。大鼠ADMSCs在体外经5-氮胞苷诱导后4周，地黄多糖干预组和单纯5-氮胞苷诱导组均未观察到自主跳动的心肌细胞，两组细胞免疫组织化学染色α-actin阳性;流式细胞仪检测地黄多糖干预组与单纯5-氮胞苷诱导组大鼠ADMSCs向心肌样细胞的转化率分别是57．89％和17．38％。 结论：Wistar大鼠脂肪组织中含有大量ADMSCs;地黄多糖可以促进大鼠ADMSCs的生长增殖，是ADMSCs在体外培养扩增的有利因素。同时，地黄多糖干预能够提高大鼠ADMSCs经5-氮胞苷诱导后向心肌样细胞的转化率。
地黄多糖 间充质干细胞 心肌细胞 诱导分化 生长增殖 体外培养
张琰琴 王玉红 王磊 秦宇红 陈光辉
中国人民解放军总医院心血管内科,北京,100853
国内会议
第六届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第三届中华医学会医学工程学分会干细胞工程专业委员会年会
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2010-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）