兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的截短表达与间接ELISA检测方法的建立
兔病毒性出血症(Rabbit Hemorhagic Disease， RHD)俗称兔瘟，是由兔病毒性出血症病毒(Rabbithemorrhagic disease virus, RHDV)引起的兔的一种急性、败血性、高度传染性、高度致死性疾病。本研究参照已发表的RHDV基因组序列，设计合成一对特异性引物，通过RT-PCR扩增VP60主要抗原区域基因片段。将目的片段克隆至pMD 18-T克隆载体，经PCR,酶切及测序鉴定后，定向克隆至PGEX-4T-1表达载体，经PCR,酶切及测序鉴定后得到PGEX-VP60重组质粒，将PGEX-VP60转化表达菌BL2I(DE3)感受态细胞，优化诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度。以最佳条件诱导表达，超声破碎细胞，鉴定目的蛋白在菌体中的表达形式。对以包涵体形式表达的重组蛋自经变性、纯化、复性后，免疫印迹检测纯化的重组蛋白的抗原性和特异性。以该蛋白为诊断抗原，通过间接ELISA反应条件的优化，以及判定标准的确定，建立检测兔病毒性出血症病毒抗体的VP60-ELISA检测方法。以建立的检测方法检测常见兔病阳性血清，确定是否发生交叉反应。将RHDV标准阳性对照血清按1: 50-1: 25 600倍稀释，用建立的检测方法检测，确定其抗体检出效价。选取8份RHDV抗体水平不同的血清，分别进行批内、批间重复性试验。通过临床血清样品的检测，了解RHDV血清抗体阳性率，并对建立的检测方法进行评价。
兔病毒性出血症病毒 VP60蛋白 截短表达 间接ELISA 检测评价
祖立闯 王金良 李娇 魏凤 沈志强
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2010-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）