角质形成细胞与红色毛癣菌共孵育体系中角质形成细胞TLR2及其信号通路中下游分子的表达
目的：检测角质形成细胞与红色毛癣菌体外共孵育体系中角质形成细胞TLR2及其信号通路中下游分子的表达变化,初步探讨角质形成细胞表达的TLR2在红色毛癣菌感染中的可能作用。 材料与方法：采用永生化的角质形成细胞(HaCaT)与红色毛癣菌菌丝片段悬液在不含血清的DMEM培养基中5％CO2环境下,37℃共孵育。分别在不阻断TLR2和阻断TLR2条件下,在共孵育4小时、8小时、16小时和24小时,吸取菌丝段悬液进行台盼蓝染色计数,计算真菌生长抑制率;提取角质形成细胞总RNA,采用半定量逆转录PCR检测TLR2、MyD88及IL-8的核酸表达水平;提取角质形成细胞膜蛋白和核蛋白,采用和Western blot方法检测TLR2蛋白表达情况和NF-κ B在核蛋白中的表达情况. 结果：不阻断TLR2,共孵育4小时、8小时、16小时和24小时,红色毛癣菌生长抑制百分率分别为46.8±8.0％、64.0±5.5％、76.3±7.7％和39.5±4.9％,随共孵育时间延长而增高,在共孵育16小时达高峰;TLR2基因和蛋白表达量随共孵育时间的延长而增加,在共孵育16小时后达到高峰;MyD88和IL-8的核酸表达水平在共孵育早期亦随共孵育时间的延长而增高,在共孵育16小时达到高峰：核提取物中NF-κB的表达量也随共孵育时间的延长而增高。阻断TLR2后,在共孵育不同时间,红色毛癣菌生长抑制率分别为26.6±4.0％、33.4±2.60％、43.0±5.2％、33.1±9.5％,较未阻断TLR2组明显降低： MyD88的核酸表达水平与未阻断组相比无明显变化; IL-8的核酸表达水平与未阻断组相比则明显下降;核提取物中NF-κ B的表达量在阻断TLR2后亦明显降低。 结论：角质形成细胞具有直接抑制红色毛癣菌生长的作用;这种作用可通过角质形成细胞表达的TLR2介导。TLR2可能通过MyD88依赖途径激活核因子-κ B并使之核转位,促进IL-8的表达,从而发挥作用。本研究为进一步研究皮肤癣菌的天然免疫机制奠定了基础。
角质形成细胞 红色毛癣菌 共孵育体系 信号通路 天然免疫机制
陈辉 刘维达 李筱芳 吕桂霞 沈永年
华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所
国内会议
青岛
中文
198-203
2007-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）