人神经生长因子在哺乳细胞CHO内表达及鉴定
目的：构建人β-神经生长因子(β-NGF)重组真核表达载体，在二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达该基因，并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。 方法：酶切Pcdna3.1-β-NGF获得β-NGF基因，将它连接到真核表达载体Pmd902中，将构建好的Pmd902-β-NGF经脂质体转染法导入到二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞中，用撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)的方法进行筛选，并用ELISA对表达产物进行鉴定。利用鸡胚背根神经节法检测表达产物活性。 结果：重组载体经OCR鉴定、酶切、测序等分析，插入的基因片段为β-NGF的基因。转染β-NGF基因的细胞上清中可检到NGF蛋白。表达产物能够促进鸡胚背根神经节的生长。 结论：成功构建了β-NGF在CHO细胞中的稳定表达体系，转染β-NGF基因的CHO细胞所分泌的β-NGF蛋白具有较高的生物学活性，为进一步研究β-NGF的生物学功能、开展生物治疗和大规模生产重组人神经生长因子奠定了基础。
人神经生长因子 基因克隆 真核表达 二氢叶酸还原酶缺陷 卵巢细胞 生物活性 生物治疗
戚菁 潘明洁 李素芹 李越希
南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系 南京 21002 南京军区军事医学研究所 南京 21002 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系 南京 21002 南京军区军事医学研究所 南京 21002
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2008-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）