牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及其应用
为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用，将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET-30a，并在大肠杆菌Escherichia coliDE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导4 h后，重组蛋白TRαA表达并形成包涵体。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化，柱上复性法对重组蛋白复性，获得纯度较高的目的蛋白，蛋白复性的效果良好。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。Dot blotting检测抗体效价达1：200000，检测证明抗体特异性良好。此外，通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合，表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控。
牙鲆 甲状腺激素受体TRαA 原核表达 抗体制备 染色质免疫沉淀
贾亮
上海海洋大学生物技术研究中心 上海 201306
国内会议
上海
中文
222-231
2009-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）