聚球藻7942生物钟基因KaiB的克隆与敲除载体的构建

摘要：

蓝藻的生物钟基因(Kai基因)簇包括3种基因:KoiA, KaiB和KaiC，它们组成了生物钟的中央振荡器部分。本文克隆KaiB基因是为了用反向遗传学研究其功能。基因克隆从设计和合成相应的引物开始。接着提取聚球藻7942的基因组DNA作为模板；用PCR扩增KaiB；与质粒PUC19相连，转化大肠杆菌DHSa,请公司测序；把测得结果经NCBI用Blast比对，证明与GenBank中聚球藻7942的同源性为100”％”。这说明，正确地克隆了KaiB，这个基因含309个碱基。把克隆到得KaiB基因与T载体相连;然后用BamH I和Sal I双酶切克隆载体pMD-KaiB和穿梭表达载体pRL-489载体大片段；用T4DNA连接酶连接这两个片段；转化大肠杆菌DHSa，涂板后用卡那霉素筛选阳性克隆：从大肠杆菌转化子中提取PRL489-KaiB载体，做酶切和电泳，鉴定KaiB基因的插入，证明敲除载体批pRL489-KaiB已构建好。

关键词： 聚球藻 生物钟基因 KaiA基因 基因克隆 敲除载体

作者: 施定基 王军成 冉凌飞 贾晓会 C Johnson 徐仲

作者单位: 天津科技大学海洋学院 天津 300457 哈尔滨工业大学海洋学院 威海 254209 首都师范大学生命科学院 北京 100037 中国科学院植物研究所 北京 100093 天津科技大学海洋学院 天津 300457 哈尔滨工业大学海洋学院 威海 254209 天津科技大学海洋学院 天津 300457 天津科技大学海洋学院 天津 300457 首都师范大学生命科学院 北京 100037 Dept．of Biological Sciences,Vanderbilt University,Nashville,TN37235,USA． 哈尔滨工业大学海洋学院 威海 254209

会议类型: 国内会议

会议名称: 庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会

会议地点: 珠海

会议语种:中文

页码: 54

在线出版日期: 2009-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）