中国大陆湖北钉螺(Oncomelania hupensis)微卫星DNA库的构建
目的：湖北钉螺是血吸虫惟一的中间宿主，在日本血吸虫病传播过程中起着特殊的作用。由于分布广泛、受地理隔离影响严重，湖北钉螺在我国大陆分布多个不同的种型。本研究通过构建湖北钉螺微卫星DNA库，以期为深入分析湖北钉螺各种型遗传分化程度和群体遗传结构，提供基础资料。 方法：利用Sau3AI酶切湖北钉螺基因组DNA，回收并富集200bp-900bp之间的DNA片段，与生物素标记的(AAT)17，(GA)25，(CCT)17，(AC)25，(CAG)17，(CA)18，(CAC)5，(TC)10，(GT)8和(TG)18等寡核苷酸探针杂交，结合亲和素后超滤离心，浓缩杂交片段，重复2次并利用PCR反应扩增富集杂交片段，插入T载体，转化大肠杆菌(Ecoli)，筛选含微卫星DNA序列的阳性克隆，测定分析其序列。 结果:本研究应用(AAT)17，(GA)25，(CCT)17，(AC)25，(CAG)17，(CA)18，(CAC)5，(TC)10，(GT)8和(TG)18共10个寡核苷酸探针对湖北钉螺进行微卫星DNA的分离和筛选，测序获得有效序列295条，所有序列经Chromas和Clustal X等软件包进行核准与比对，结果显示其中含有微卫星的有效序列207条。其中以双核苷酸重复占多数，三核苷酸重复序列重复次之，多核苷酸重复比较少见；重复序列以(CA)n和((GT)n数量最为丰富，重复次数最多的(CA)n可达98次，根据Weber (1990)对微卫星DNA序列的分类标准，本研究获得完整重复序列51条(24.6”％” )，非完整重复序列124条(59.9”％” )，复合重复序列有32条(15.5”％” )。 讨论：微卫星DNA核心序列在基因组中呈串联重复排列，其重复序列和长度表现较高的多态性，对于揭示物种遗传多态性具有重要意义。由于缺少湖北钉螺基因组的数据，目前仍少有湖北钉螺微卫星DNA的研究报道。本研究初步构建了湖北钉螺微卫星DNA库，为进一步探讨湖北钉螺不同种型遗传分化、群体遗传变异奠定了基础。
湖北钉螺 微卫星DNA 遗传分化 遗传结构 日本血吸虫
李石柱 马琳 马雅军 刘琴 王强 张仪 周晓农
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海，200025 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海，200025 陕西师范大学生命科学学院，西安，710062 第二军医大学病原生物学教研室，上海，200433
国内会议
中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会
南昌
中文
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2009-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）