特异性HER-2 siRNA对BT-474细胞抑制作用的实验研究

摘要：

目的：通过特异性HER-2 siRNA对BT-474细胞抑制作用的实验研究为RNAi技术用于乳腺癌的防治提供基础的实验依据。 方法：设计并构建3种特异性HER-2 siRNA质粒(pRNAT-U6.1／Neo-siRNA-1、pRNAT-U6.1／Neo-siRNA-2及pRNAT-U6.1／Neo-siRNA-3)和1种无关序列质粒(pRNAT-U6.1／Neo-siRNA-neg)。在阳离子脂质体介导下，用重组质粒转染HER-2过表达的人乳腺癌BT-474细胞株，筛选出稳定转染重组质粒的细胞株，分别用RT-PCR法和westem blot法检测特异性HER-2 iRNA对BT-474细胞HER-2 mRNA和蛋白表达的影响，用MTT法检测对细胞生长的抑制作用。 结果：在阳离子脂质体介导下，用重组质粒转染BT-474细胞，成功筛选出阳性稳定转染重组质粒的细胞株。RT-PCR方法检测结果显示：siRNA-1组和siRNA-2组细胞HER-2 mRNA水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.05)，抑制率分别达到61.04％和41.05％，而无关序列siRNA-neg组HER-2 mRNA水平与阴性对照组比较无显著下降。Western blot方法检测结果示：siRNA-1组和siRNA-2组细胞的HER-2蛋白水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.05)，抑制率分别达到59.34％和38.01％，空质粒组和负对照组HER-2蛋白水平略有下降，但其HER-2蛋白抑制率和阴性对照组之间无显著性差异。MTT法测定结果显示：siRNA-1组与阴性对照组相比能显著地抑制BT-474细胞增殖(P<0.05)，而siRNA-neg对BT-474细胞增殖的影响与阴性对照组相比无显著性差异。 结论：本实验中证明了特异性HER-2 siRNA能特异性下调BT-474细胞中HER-2基因水平和蛋白水平的表达，显著抑制BT-474的生长。该实验为RNAi治疗乳腺癌提供了一定的实验依据。

关键词： 乳腺癌 RNA干扰 HER-2基因 蛋白表达 BT-474细胞 抑制作用

作者: 张绪慧 罗荣城

作者单位: 南方医科大学附属南方医院肿瘤科，广东广州 510515

会议类型: 国内会议

会议名称: 2007亚太国际肿瘤生物学和医学学术会议暨首届解放军总医院肿瘤综合防治高峰论坛及第二届中国中青年肿瘤专家论坛

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 3-13

在线出版日期: 2007-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）