鸭MHC—Ⅰα链胞外区成熟肽基因克隆、序列分析及其表达载体的构建
目的：克隆鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因cDNA序列，构建并鉴定其原核表达质粒pET/Du MHC—I. 方法：从GenBank/DDBJ/EMBL基因库中读取鸭MHC—I基因进行序列分析并设计1对引物，使用RT—PCR法从鸳鸯鸭脾脏组织中扩增MHC—I α链胞外区成熟肽基因cDNA,T—A克隆到pGEM—TEasy载体中。将该基因片段亚克隆入pET-28a(+)载体，构建重组表达质粒pET/Du MHC-I。 结果：测序结果表明，获得了MHC—I α链胞外区成熟肽基因，其大小为813 bp，编码271个氨基酸。与GenBank中登录的鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因序列的同源性为89.4”％”—91.7”％”，氨基酸同源性为78.2”％”-83.7”％”。与GenBank上已登录的鸡、鹅、鹌鹑、草鱼、狗、猪、鼠和人的MHC—I α链胞外区成熟肽氨基酸序列的同源性分别为64.6”％”、79.3”％”、59.4”％”、41.0”％”、26.6”％”、45.0”％”、12.5”％”和22.1”％”，这表明MHC—I α链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性，且亲缘关系越近，同源性越高。所获重组表达质粒pET/Du MHC—I经PCR、酶切、测序鉴定，证实鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因Cdna正确克隆入pET-28a(+)表达载体。 结论：成功克隆出鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因，并构建重组表达质粒pET/Du MHc-I，为进一步研究鸭MHC—I蛋白表达，重组蛋白活性鉴定及其在抗原识别和免疫应答中的作用奠定基础。
鸭 胞外区成熟肽基因 克隆技术 序列分析 表达载体
孙凯 李新生 崔保安 陈红英 魏战勇 张蕾 宋亚鹏 阮武营
河南农业大学牧医工程学院 河南郑州 450002 河南省动物性食品安全重点实验室 河南郑州 450002
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石家庄
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2009-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）