猪骨骼肌肌钙蛋白I基因的表达及其单克隆抗体的制备
猪骨骼肌肌钙蛋白I是猪肉所特有的一种蛋白质，可以作为一种耐热种类标志蛋白来区分于其他熟肉制品的肉种类来源.本研究根据TNNI1 cDNA序列(AY282922)设计合成了一对引物TnI—SP1/TnI—SP2，利用RT—PcR方法成功克隆到到猪TnI—S4基因(登录号为EU732736)，该基因大小为546bp，编码187个氨基酸。同时构建了该基因的原核表达载体(pKG—TnI—slow和pET-32a-TnI-slow)，在E. coli BL21(DE3)中表达发现表达产物分子量大小为47KD和41KD的蛋白条带，与预期融合蛋白GST-TnI-slow和HIS—TnI—SLOW的分子量大小一致.Western-blotting分析进一步表明表达产物GST—TnI—SLOW融合蛋白具有良好的免疫活性.利用纯化的GST—TnI—SLOW融合蛋白，本研究还制备了抗猪慢骨骼肌亚型肌钙蛋白I单克隆抗体，特异性试验表明该单抗对熟猪肉样品显示阳性，而与其它动物肉样品没有明显的交叉反应性。 本实验研究结果为今后检测猪肉的夹心BLISA方法的确立奠定了基础。
猪骨骼肌三聚氰胺 原核表达 多克隆抗体 单克隆抗体 基因表达
孟宪荣 周蕾蕾 栗绍文 周祖涛 毕丁仁 陈辉 齐冰玉
华中农业大学动物医学院 湖北武汉430070
国内会议
石家庄
中文
299-303
2009-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）