高表达HPV16L1蛋白重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达研究
目的：通过基因优化及定向插入多拷贝的方法构建高表达的HPV16L1蛋白重组质粒，并研究其在毕赤酵母中的表达情况。 方法：优化HPV16L1基因序列及质粒结构，构建了四种表达质粒pPIC3.5K-HPV16L1、pPIC3.5K-HPV16L1-UTR-O(optimized)、pPIC3.5K-HPV16L1-O、pPIC3.5K-HPV16L1-O-UTR-O分别电转化入毕赤酵母宿主菌GS115，经甲醇利用表型鉴定，挑取Mut+表达阳性重组菌株，甲醇诱导目的蛋白的表达，经Western blot特异性检测蛋白表达，以比较不同基因优化手段对目的蛋白表达的影响。选取蛋白表达较好的质粒进行多拷贝构建，比较不同拷贝数对HPV16L1蛋白的表达影响。 结果：pPIC3.5K-HPV16L1-O、pPIC3.5K-HPV16L1-O-UTR-O两种质粒结构转化毕赤酵母菌株后有目的蛋白可见量的表达，而另两种结构的质粒pPIC3.5K-HPV16L1、pPIC3·5K-HPV16L1-UTR-O没有目地蛋白可见量的表达。构建的三拷贝表达质粒转化菌株的HPV16L1的表达量明显高于-拷贝质粒转化菌株。 结论：HPV16L1蛋白密码子的优化对蛋白表达量的提高有显著影响，质粒结构即UTR的优化不是影响HPV16L1蛋白在毕赤酵母中表达量提高的关键因索;构建含高拷贝数表达质粒的工程菌可提高HPV16L1蛋白在毕赤酵母中的表达量。
毕赤酵母 基因优化 质粒结构 蛋白表达
徐绎涵 楼觉人
上海生物制品研究所研发部，上海 200052
国内会议
兰州
中文
74-81
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）